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| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZ-75235 |
| 用途 | 僅限科研，不用于臨床 |
| 包裝規(guī)格 | 20T/50T |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 |
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬藍(lán)耳病（變異毒）一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢(shì)價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購(gòu)。
產(chǎn)品詳細(xì)信息
名稱：豬藍(lán)耳病（變異毒）一步法RT-PCR診斷試劑盒
規(guī)格： 20T/50T
品牌：上海滬崢
【操作步驟】
1.RNA提取
(1) 取疑似鴨病毒性肝炎的病料（*、*、淋巴結(jié)等）1~4g于無菌研缽，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀釋成1：4乳劑，分裝1.5ml滅菌EP管，反復(fù)凍融2~3次，8000r/min離心5分鐘。（病毒培養(yǎng)液，只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘）
（2）取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。
（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。
（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。
（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。
（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。
（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。
（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。
（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/span>
3 .PCR操作
4.電泳
稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲(chǔ)存?zhèn)溆茫谖⒉t中熔解，加入1.5uL的TU-8混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物5uL混合1uL TU-7，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加3uLTU-6，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。
【結(jié)果判定】
如果為藍(lán)耳病毒感染陽性，會(huì)有兩種電泳結(jié)果，一種為目的
片段低于500 bp（約470bp），為藍(lán)耳病毒變異株感染（Nsp2
基因缺失）；另一種結(jié)果為出現(xiàn)大于500bp片段（約為560bp），
為Nsp2基因未發(fā)生缺失的豬藍(lán)耳病毒感染。
在450bp位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性
豬藍(lán)耳病（變異毒）一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項(xiàng)】
1. 每次使用，開蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。
3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。
4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。
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