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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZW0837 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品名稱：鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)
包裝：50T
用途:本產(chǎn)品僅供科研與實(shí)驗(yàn)使用，不用于臨床診斷等
目的：本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發(fā)病動(dòng)物等組織、體液或淋巴結(jié)等標(biāo)本中禽流感病毒rna，用于禽流感病毒感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)在PCR 管中加入下列成分：
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成份 |
樣品 |
陽性對(duì)照 |
陰性對(duì)照 |
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雙酶一管式 RT-PCR Buffer， 2× |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
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EMCV 專一性引物對(duì) |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
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樣品 RNA |
1-5 uL |
無 |
2 uL |
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EMCV 陽性對(duì)照 |
無 |
2 uL |
無 |
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補(bǔ)超純水到 |
28 uL |
28 uL |
無 |
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MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)操作步驟
取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑
Duck 反應(yīng)液
酶液
用量
20μL
1μL
加樣（樣本處理區(qū)）將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟
循環(huán)數(shù)
溫度
時(shí)間
收集熒光信號(hào)
1
1 cycle
95℃
10min
否
2
40 cycles
94℃
15sec
否
55℃
30sec
是
結(jié)果分析判定設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出
現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。
判斷a) 檢測通道 Ct 值≤30，有 FAM 熒光信號(hào)檢出，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，判斷樣品為陽性。
b) 當(dāng) 30<Ct 值≤35 時(shí)，且有典型的擴(kuò)增曲線時(shí)，則需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。再次擴(kuò)增后檢測體系的Ct 值仍≤35，且有典型的擴(kuò)增曲線，則判定該樣品含有相應(yīng)的動(dòng)物源性成分。當(dāng)再次擴(kuò)增后，檢測體系 Ct 值＞35，或無典型的擴(kuò)增曲線，則判定該樣品不含相應(yīng)的動(dòng)物源性成分。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
a) 空白對(duì)照：無FAM 熒光信號(hào)檢出或 Ct 值≥35，未出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。
b) 陰性對(duì)照：無FAM 熒光信號(hào)檢出或 Ct 值≥35，未出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。
c) 陽性對(duì)照：有 FAM 熒光信號(hào)檢出，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，Ct 值＜30。
d) 以上應(yīng)同時(shí)滿足，否則本次實(shí)驗(yàn)無效。
需要注意*：
PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)
1，嚴(yán)格的質(zhì)控體系：所有試劑盒從原料到成品經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控，確保試劑盒質(zhì)量及穩(wěn)定性
2，產(chǎn)品不斷優(yōu)化，很好的靈敏度；
3，綜合指標(biāo)特性，研發(fā)便捷操作的試劑盒；
4，檢測驗(yàn)證樣本多樣；
5，專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)為客戶提供個(gè)性化的定*務(wù)；
6，提供食品安全藥物殘留Elisa試劑盒，以及快檢試劑盒
7，完善專業(yè)的售前售后服務(wù)
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