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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG712 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 是否進口 | 否 |
漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一，產(chǎn)品優(yōu)勢 樣品種類多，質(zhì)控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內(nèi)外廣大科研工作者使用，被稱謂：質(zhì)量信得過產(chǎn)品
通用名稱：漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格：50T/盒
英文名稱：HTV-2Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑：樣品 RNA
【檢驗原理】
本試劑盒對漢坦病毒2型（HTV-2）基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。
漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)試劑組成】
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名 稱 |
規(guī) 格 |
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酶液 |
50μL×1 管 |
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HTV-2反應(yīng)液 |
500μL×2 管 |
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HTV-2陽性質(zhì)控品 |
50μl ×1 管 |
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陰性質(zhì)控品 |
250μl×1 管 |
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運輸】上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理：
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
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試劑 |
HTV-2反應(yīng)液 |
酶液 |
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用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
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步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
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1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
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2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
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55℃ |
30sec |
是 |
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
注意事項
：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）
取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
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